一、目的

　　通过氨基酸的分⊙离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。

　　二、原理

　　纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。

　　层︾析溶剂由有机溶剂和水组成。

　　物质被分离后在纸层析图〖谱上的位置是用Rf 值(比移)来表示的：

　　R=原点到层析点中心的距离

　　原点到溶剂前沿的距离

　　在一定的条件下某种物质的Rf 值是常数。Rf 值的大小Ψ与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分◇离氨基酸。

　　三、器材

　　1、层析缸① 2、毛细管3、喷雾器4、培养皿

　　5、层析滤纸(新华一号)

　　四、试剂 蛋白实验技术论坛 http://bbs.bbioo.com/forum-139-1.html

　　1、扩展剂

　　是4 份水饱和的正丁醇和1 份醋酸的混合物。将20mL 正丁醇和5mL 冰醋酸放入▆分液漏斗中，与15mL 水混合，充分振荡，静置▓后分层，放出下层■水层。取漏斗内的扩展剂约5mL 置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用「.

　　2、氨基酸溶液0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮※氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0.5%)。各5mL

　　3、显色剂50~100mL

　　0.1%水合茚三铜正丁醇容液。

　　五、操作

　　1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中№。

　　2、取层析滤纸▅(长22cm、宽14cm)一张。在纸的一端距边缘2~3cm处用铅♂笔划一条直线，在此直线上第间隔2cm 作一记号╲如右图。

　　3、点样用毛细管将各种氨基酸样品分别点在这6 个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径①最大不超过3mm。

　　4、扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20mL扩展剂的培养皿建迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于ω　培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需你于点样线1cm)。待溶剂上升15~20cm 时即取出滤纸，自然』干燥或用吹风机热风吹干。

　　5、显色用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮○正丁醇溶液，然后置 烘箱 中烘烤5 分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。

　　6、计算各种 氨基酸 的Rf 值。