大鼠糜蛋白酶（Chymotrypsin）试剂盒说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，组织及相关液体样本中糜蛋白酶（Chymotrypsin）的含量。糜蛋白酶实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠糜蛋白酶（Chymotrypsin）水平。用纯化的大鼠糜蛋白酶（Chymotrypsin）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入糜蛋白酶（Chymotrypsin），再与HRP标记的糜蛋白酶（Chymotrypsin）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加＠底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的糜蛋白酶（Chymotrypsin）呈正相关。用酶标仪ξ在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠糜蛋白酶（Chymotrypsin）的浓度。 糜蛋白酶々试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准♂品：360 U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存样◥品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓★缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集●上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离←心。2. 血浆：应□根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收『集上清，保存过程中如有沉淀形←成，应该↘再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成○，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份∑时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时「，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复№冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅↓速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早╲进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能』马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣〒根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤：标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各☆取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第』三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第※七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第≡十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为240 U/L ，160 U/L，80 U/L，40U/L，20 U/L）。 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样↘品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中∏先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终◥稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 温育：用封板膜Ψ 封板后置37℃温育30分钟。 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 洗涤：小心▂揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤：操作同5。 显色：每孔★先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加↓终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 测定：以空白空调零，450nm波长∩依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟〓后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密◥封袋中保存。 浓洗涤液可能会有结＠ 晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准ζ　确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量【多，推荐使用排枪加样。 请每次测定的同时做标准曲线，最好做◆复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀◇释倍数（×n×5）。 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 底物请避光保存。 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 本试剂不同︽批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以∮英文说明书为准。计算：以标准物的〖浓度为横坐标，OD值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根√据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与OD值计※算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值 代入方程式，计算出样品浓度▃，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数▅R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%保存条件及▲有效期：1.试⊙剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月郑州唯尔生物科技有限公司是一家集科研、生产、销售为一体的综合性企业，公司业务广泛涉及到生物制剂、化工试剂及化工原料、临床前』检测用及耗材、elisa试剂盒、抗体、标准品、培养基等多种生①物制品。种类齐全，质量值得信赖，欢迎新老客户前来垂询！！！