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                教育装↑备采购网
                第六届图书馆论坛580*60

                小鼠腹腔巨噬细胞培养实验

                教育装备采购网 2014-09-15 09:28 围观1363次

                  小鼠腹腔巨噬细胞培可以:(1)吞噬与清除异物;(2)分泌生物活性物质;(3)对仿生全降解材料,降解后的无机产物与生命过程中有机物的合成作用。

                  实验方法

                  细胞培养技术

                  实验方法原理 取小鼠腹腔巨噬细胞与乳胶颗粒在不同培养条件下混合后定量加入24孔板,37 ℃,5% CO2 培养箱中孵育后,荧光显微镜下计数吞噬百分率和吞噬指数。

                  实验材料

                  小鼠

                  试剂、试剂盒

                  1640 培养基 小牛血清 双抗 台盼兰

                  仪器、耗材

                  手术器械 一次性注射器 眼科镊 眼科剪 96 孔板 CO2培养箱

                  实验步骤

                  一、实验步骤

                  1. 如果采用刺激物,则可在实验■前三天腹腔注射3%巯基乙醇酸钠每只2 mL,获得的巨噬细胞数要多一些。不采用刺激物,直接开始下面的步骤。

                  2. 拉颈处死小鼠,在75%酒精浸泡1-2 分钟,移入超净台中,仰卧位固定于解剖板上,碘酒消毒腹部皮肤,酒精绵︻球脱碘。用手★术直剪充分剪开腹部皮肤,暴露腹部肌层,再用酒精绵球消毒腹部肌层。

                  3. 用注射器抽取5mL 含双抗的RPMI 1640 培养基注入腹腔,用绵球轻揉腹部〇1-2 min,然后,用眼科镊稍提起腹腔,并用眼科剪剪开一个小口,用吸管吸取细胞悬液,移入离心管中(个人认为,此法比用注射器抽吸好一些)。

                  4. 1000 rpm 离心5 min 后,用含双抗的RPMI 1640 培养基洗涤一次,再次离心,重悬细胞于含10% 小牛血清▃的RPMI 1640 培养液中,如果是作为饲养细胞使用,则选择相应的培养液。台盼蓝拒染法计数,将细胞稀释到目的浓度后,接种即可。

                  5. 如果是作为饲养细胞使用,调整浓度至2x105个/mL,接种到96 孔板中,每孔100-200 μL;如 果作为其它实验使用,可以调整成2x106/mL,加到 24 孔平底培养板中,1 mL/孔;5% CO2温箱孵育2 h 后, 换液,并用RPMI 1640 培养基洗1-2 次,弃去未粘附细胞,贴壁细胞为单层的巨噬细胞。

                  二、结果

                  巨噬细『胞刚贴壁时偏圆形,或者类似鹅卵石形状,然后慢慢伸出伪足◎,铺开呈三角形或多角形。巨噬细⊙胞有吞噬的特性,当与细菌混合在一起的时候,在40 倍物镜下可以看到巨噬细胞吞噬细菌,因此,巨噬细胞作为饲养细胞可以清除部分污染的细菌、支原体『和部分细胞碎片。

                  收起

                  注意事项

                  注意事项:严格无菌操作,在超净台内进@行;为避免交叉感染,每一只小鼠更换注射器;吸管吸取细胞悬液的时候,尽量不要吸到大小∮肠,否则容易引起成纤维细胞污染。

                  展开

                  其他

                  一、讨论

                  巨噬细胞一般没有特殊的鉴定方法,有两条经验:

                  1. 巨噬细胞是终末分化细胞,不会增殖

                  2. 很难消化下@ 来,所以接种的时候,必须直接接种到目的培养器皿中。

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