植物组培广泛应用于植物科研，如模式植物，作物育种等，工厂化生产，如观赏花卉植物，中药材生产，园林园艺等，但是组培过程中种苗的污染是广大工作者最头疼的问题，尤其是真菌污染，常用的抗生素根㊣ 本无法有效的抑制和清除，来自美国Plant cell Technology公司的专家针对这一问题，研发了一款高效的植物组培微生物污染清除试剂——PPM(Plant Preservative Mixture),该产品能非常有效的抑制和清除组培过程中产生的污ξ 染问题，且无需★过滤灭菌，能直接与培养基一同高压灭菌，使用非常方便，此项发明〓也申请了专利：
产品专利说明：
PPMTM - Plant Preservative Mixture是专利产品，其商品名称，配方及使用方法等都受专利保护，专利号5,750,402。
产品名称：PPMTM - Plant Preservative Mixture（植物组织培养抗菌保护剂）
货号：PPM
保存条件：4o C
运输条件：常温
物理性质：溶液
性状：无色至琥珀色透明液体
pH值：3.8
有效期：见☉瓶身标签说明
产品描述：
1. PPMTM 是一种热稳定的抗菌剂，用于植物组织培养中植物的微生物污染防治与清除；
2. 在合理的使用剂量下，PPMTM是一种非常有效的植物组培抗菌剂与保护剂，不会对植物的生长（如种▓子萌发，愈伤增殖、再生等）产生任何影响，可视为培养基标准配方成份；
3. PPMTM主要用于预防和消除来自空气、水源或者人体接触等外界※因素导致的植物组培过程中的微生物污染，同时，对于植物内生菌也同样具有非常好的抑制效果；
4. PPMTM广泛适用于绝大多数被子植物和裸》子植物，但是不推荐用于蕨类植物、藻类等水生植物；
5. PPMTM具有热稳定性，能直Ψ 接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；
6. PPMTM 相对于常规抗生素而言，性价比更高。
作用机理：
PPMTM的活性成分能渗透细菌或者真菌细胞壁，抑制呼吸作用中三羧酸循环和电子传递链过》程中关键酶的活性，同时，也能阻断细菌和真菌吸收和利用培养基中单糖和氨基酸的过程，从而实现预防和清除植物组织培养过程中的微生物污染。
相对抗生素的优势：
1. PPM TM能广泛抑制和清除细菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌发；
2. PPM TM是通过抑制多种酶的╱活性而达到抑菌效果，从而能避免耐药突变体的发生；
3. PPM TM具有热稳定性，无需过滤∞灭菌，能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；
4. PPM TM性价比更高，可更加广泛的应用于更多的科学研究、作物育种、组培苗工厂化生产中。
常规使用简介:
以下使用指南是针对大多数情ζ况下的常规使用说明，特殊情况可做适当调整。
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使用指南 |
污染预防 |
消毒灭菌 |
抑制农杆菌 |
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浓度 (v/v) |
0.05 – 0.2% |
5.0% (see note) |
0.05% |
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处理时间 |
持续 |
4 – 12 hours |
持续 |
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说明 |
1. 具体使用浓度根据处理样本有所不同； |
1. 将组织加入到含5%PPM?的3X MS*盐溶液中，搅拌4-12小时； 3.处理完成以后将组织转移到含0.05%PPM的培养ζ 基中； |
与其他抗生素配合使用效果更佳 |
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*说明：MS盐溶液是泛指，如样本的培养基盐溶液不是MS盐，以具体适用的培养基盐溶液为准；
操作说明：
以下操作说明是针对大多数情况下的常规使用说明，必要时，可根据具体植物样』本情况进行适当调整，如需更多指导可联系Dr. Assaf Guri at guri1@erols.com。
1. 常规用量：
一般推荐使用使用浓度为0.05%-0.2%（1L培养基中加入0.5-0.75ml PPM?），愈伤增殖，器官形成，胚性组织发育等○使用浓度为0.05%-0.075%。
说明：
(a) 含有PPM?的培养基无需在超净工作台中分装，在培养基凝固以后将培养瓶/皿盖子盖
好即可。如使用自动灌装系统，建议在灌装前后将分装管用∏高压灭菌热水处理；
(b) 如果培养基储存液保存在无菌容器中并未︽经污染的情况下，加入PPM?配制的培养基
无需再次过滤或者高温灭菌。如果是营养培养基，如含有200mg/L甚至更高浓度氨基酸或者蛋白质的培养基，建议过滤灭菌。
2. 植物内生菌污染处理：
(a) 种子：PPM?不推荐用于直接处理含有大量的细菌或真菌孢子◣的种子灭菌，对于种子离体萌发，建议先采用传统方法消毒，然后置于含2-3%PPM?的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万①不能添加Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有PPM?(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养╲基里；
(b) 外植体：以1cm外植体为例，将外植体置于含4-5%PPM?的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有PPM?(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养基里；
(c) 对于块茎，球茎和鳞状物的观赏植物样本：将其整体放入消毒剂中搅拌消毒处理以后，用水冲洗干净，将材料切成薄片，置于含4-5%PPM?的全培养基础╲盐培养液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20和调节pH，处理完成以后无需冲洗直接插入含有0.1-0.2%的PPM?的培养基里进行培养。
3. 如果厚的外植①体、污染严重的植株、种子等样本经过以上处理仍得不到理想效果，可尝试以下操作：
(a) 将材料浸泡在水中持续搅拌处理(松软组织搅拌1小时，硬实组织搅拌2小时)；
(b) 将※材料在含50%的PPM?全培养基础盐溶液中搅拌处理5-10分钟，此过程千万不能添加Tween20和调节pH；
(c) 无需冲洗，将处理过的材料直接加入到培养基中即可。对于真菌污染，可在培养基中加入适当浓度的PPM?。对于真菌细菌混合性污染，建议在培养的第一个月的培养基中加入0.05%-0.2%的PPM?。
4. 严重◆污染材料污染去除与抢救（重污染不超过一周）：
(a) 将污染的材料至于流水中用软刷刷洗，然后置于含50% PPM?的无菌水◤溶液中搅拌5-15分钟，对于细菌或者混合性污染，建议使用100% PPM?与0.6g/L的柠檬酸无菌水溶液按1：1混合的低pH(2.8-3.2)的酸性卐溶液处理；
(b) 处理后的材料无需清洗，直接插入含0.05%-0.25的PPM?的培养基中培养至少一个月以上，其中前10天需要弱光」培养；
对于一些真菌、孢子和细菌污染隐藏较深，PPM?无法接触到的部位，建议在初步的清洗以后，将材料切开，然后再放入含50%PPM?的无菌水溶液中搅拌5-15分钟处理。
5. 农杆菌的去除：
共培养以后，将样本用无菌水清洗，然后将样本浸没在100% PPM?（补充4X的培养基盐溶液）中处理2分钟，取出后用无菌纸吸干后并置于常用抗性培养基中培养，3周后，更⊙换到只含有0.05%-0.075% PPM?(无常用抗生素)的培养基中培养。
使用注意事项：
1. 在所有PPM?消毒处理外植体的过程中，尽量保证容器的体积足够大，并使外植体材料所有面积与含PPM的处理溶液充分接触，以保证消毒效果；
2. 如果外植体出现高度氧化现象，不要扔弃，大约50%的外植体在4-6周内即可恢复①；
3. 50% PPM? 的处理溶液可以重复使用但是不推荐，因为使用次数和效果受外植体的体积与接种密度的影响。将50% PPM? 的处理溶液保存在4oC 可适当延长其活性，一般可使用不超过10次。如果必要，建议配制2份50% PPM? 溶液，一份用于外植体消毒♀内生菌污染，另一份用于消除“培养过程中”的轻度污染材料抢救，第二份溶液←在每次处理过后需要用0.2mm滤器过滤；
4. 如果50% PPM? 溶液处理效果不理想，可采用100% PPM? 溶液进行处理，处理方法相同，但使用次数不得超过10次。
安全说明：
1. 虽然PPM?是无毒性的，但是在使用过程中还需尽量避免直接与人体皮肤等直接接触，建议使用时佩戴手套，保持空间空气流通，如不慎吸入，先马上因大量纯净水后立即就医→，如不慎入眼，立刻用大量水冲洗眼睛15分钟，用肥皂清洗PPM?接触过的皮肤部位；
2. 含PPM?的培养基垃圾处理与常规培养基处理方法相同。
