猪水疱病病毒抗体(SVDV-Ab)ELISA检测试▲剂盒检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被猪▼水疱病病毒抗体(SVDV-Ab)捕获抗原々的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并◥在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪水疱病病毒抗体(SVDV-Ab)呈正相关。用酶标∮仪在450nm 波长♀下测定吸光度（OD 值），计〗算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素々抗凝。3000转离心30分钟取█上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和ぷ聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理ㄨ盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量∮分装，冻存于-20℃，避免反复◣冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注∩意事项1. 试剂盒保№存在2-8℃，使用前ㄨ室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 预处理后↓的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。4. 严格按照说明书中标明的时间←、加液量及顺▲序进行温育操作。5. 所有液体组〇分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置 备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无标准品（400pg/ml） 0.5mL 0.5mL 按说明书进行稀释标准品稀释液 6mL 3mL 按说明书▽进行稀释样本稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释检测抗体』-HRP 6mL 3mL 无20×洗涤缓冲液→ 20mL 20mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张 无说明书 1份 1份 无自封袋 1个 1个 无注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：400、200、100、50、25、0pg/ml.试剂的准备︻ 20×洗涤缓冲液的稀⌒　释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲¤液加19份的蒸馏水∑。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体▓，每孔加满洗涤▲液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机△：每孔注入▽洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取♀出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什≡么都不加；标准品孔◥各加不同浓度的标准品50μL；3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本〓稀释液40μL；4. 随后标准♀品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体50μL，，用封板◥膜封住反应孔，37℃水浴∮锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去◥洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗▂板5次（也可用洗板机洗ㄨ板）。6. 所有↑孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 所有孔加入终止∮液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归∩曲线，按曲线方程计算各样本№浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：最低检测浓度≡小于1.0 pg/ml。3. 特异性：不与其它可溶性＠ 结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异⊙系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月7. 检测范围：6.25pg/ml-400pg/ml免责声明1. 试剂盒仅供研究☆使用，不得用于临床实╱验或猪体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照◆说明书操作，不同批号不可交换使用，实验』者违反说明书操作，后果由实验者承担。