实验原理丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸△性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮)，其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶〓性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，532nm处也有吸收。植物遭受干№旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应〖物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消∞光度值，所以在蔗√糖、MDA与TBA显色反应中需♀一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100～300μg/g DW，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0.5μmol/L。
A. 直线回归法
MDA与TBA显色反应☆产物在450nm波长下的¤消光度▃值为零。不同浓度的蔗糖(0～25mmol/L)与TBA显色反应产物在450nm的消光度值↓与532nm和600nm处的消光度值之差成正相关，配制一系列浓度的蔗糖与TBA显色反应⊙后，测定上述三个波长的消光度值，求其直线方程，可求算糖分在532nm处的消光度值。UV-120型紫外可见分光光度计的直线方程为：
Y532=﹣0.00198+0.088D450 ①
B.双组分分光光度计法
据朗伯-比尔定律：D=kCL，当液层①厚度为1cm时，k=D/C，k称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有数种吸光物质时，某一波长下的消光度值Ψ等于此混合液在该波长下各显色物质的消光度之和。
已知蔗糖与TBA显色反应产物在450nm和532nm波长下的☉比吸收系数分别为85.40，7.40。MDA在450nm波长下无吸收，故该波长的比吸收系数为0，532nm波长下的♀比吸收系数为155，根据双组分分光度计法建立方程组，求解方程得计算公式：
C1(mmol/L)=11.71D450 ②
C2(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 ③
式中 C1-为可溶性糖的浓度;
C2-为MDA的浓度;
D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的消光度值。
实验试剂10%三氯乙酸(TCA);0.6%硫代巴比妥酸，先加少量的氢氧化钠(1mol/L)溶解，再用10%的三氯乙酸定容※;石英砂。
实验设备紫外可见分光光度计1台;离心机1台;电子天平1台;10ml离心管4支;研钵两套;试管4支;刻度吸管：10ml 1支，2ml 1支;剪刀1把。
实验材料受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官实︽验步骤 1. 实验材料 受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官。
2. MDA的提取 称取剪碎的试材▓1g，加入2ml 10%TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8ml TCA进一步研磨〗，匀浆离心(4000×g)10min，上清液为样品提取液。
3. 显色反应和测定〗 吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6%TBA溶液，混匀物于沸水∩浴上反应15min，迅速冷』却后再离心。取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的消光度。
4. 计算含量
(1) 直线方程法 按公式①求出样品中糖分在532nm处的消光度值Y532，用实测532nm的消◣光度值减去600nm非特异吸收的消光度值再减＠ 去Y532，其差值为测定样品中MDA-TBA反应产物在532nm的消光度值。按MDA在532nm处的毫摩尔消光系数为155换算求出提■取液中MDA浓度。
(2) 双组分分光光度法 按公式③可直接求得植物样品提取液中MDA的浓度。
用上述任一方法求得MDA的浓度，根据植物ζ组织的重量计算测定样品中MDA的含量：
MDA(μmol/g FW)= (MDA浓度(umol/L)*提取液体▽积(ml))) / 植物组织鲜重(g)
注意事项1. 0.1-0.5%的三ω氯乙酸对MDA—TBA反应较合适,若高于此浓度,其反应液的非专一性吸收偏高;
2. MDA-TBA显色反应的加热时间,最好控制≡沸水浴10-15min之间.时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下ω 降;
3. 如待测液浑浊,可适当增加离心力及时间,最好使□ 用低温离心机离心.
4. 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应,当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3 (最终浓度※为0.5 nmol·L-1)
5. 可溶▲性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收(最大吸收→在450 nm),当植物处于干旱,高温,低温等逆境时可溶性糖含量会增高,必要时〓要排除可溶性糖的干扰.
