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                小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg) ELISA试剂盒使用方法

                教育装备采购网 2014-01-08 08:26 围观97次
                使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中乙型肝炎e抗原(HBeAg)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固╲相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入乙型肝炎e抗原(HBeAg),再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用∏下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙型肝炎e抗原(HBeAg)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)浓度。 试剂盒组↓成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(160IU/L) 0.5ml×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个标本∞要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文①献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能☉检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80IU/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液40IU/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液20IU/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液10IU/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液5IU/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操∩作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔①加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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