各试◥剂在使用前平衡至室温。实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，应在试管中将●样品用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡╳，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为△保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加①检测溶液A工作液 100ul(取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配♀制，轻轻混匀，在使用前ㄨ一小时内配制)，37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内▂液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100ul，37℃，60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底▓物溶液90ul，37℃避光显色(30分钟内)(此时肉眼▲可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显)。
7. 依序每孔々加终止溶液50ul，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同※。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止ぷ液。
8. 用酶◥联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液▓及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
2.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密◥闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
3. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，不要一次用完。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶︼液B工作液。
4. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
